一、实验准备

尊龙凯时-人生就是博推荐使用wako质谱级赖氨酸内切酶125-05061进行生物医学研究，确保实验的高精度和可靠性。

二、酰胺酶单位的定义

酰胺酶单位是在30℃、pH 9.5条件下，每分钟生成1μmol对硝基苯胺的酶量。单位计算公式为：
AU/vial = [(a-b)/25] × (1/962) × (40/01)
其中，a为检测样品中的吸光度，b为空白对照中的吸光度。

三、实验操作流程

在实际操作中，建议使用聚硅酮处理的微量离心管和吸管，以防止蛋白质的非特异性吸附。同时，选用适合质谱分析的凝胶染色试剂盒，例如银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701）。
实验步骤如下：

1. 电泳分离蛋白质样品。
2. 从凝胶中切割蛋白质片段并放入微量离心管。
3. 使用试剂盒中的脱色溶液进行凝胶脱色。
4. 加入300μL乙腈，振荡30分钟。
5. 去除乙腈后，用Parafilm膜覆盖微量离心管。
6. 在Parafilm膜上打孔，进行真空干燥15分钟。
7. 使用100μL 10mmol/L DTT溶解于100mmol/L碳酸氢铵，在56℃恒温1小时。
8. 冷却后，加等量的50mM碘乙酰胺于100mmol/L碳酸氢铵中，避光恒温45分钟并涡旋。
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟。
10. 用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟。
11. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵溶胀凝胶片段15分钟。
12. 再次用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟。
13. 去除液相，真空干燥凝胶片段15分钟。
14. 用100μL赖氨酸内切酶溶液在冰水浴中溶胀凝胶片段45分钟。
15. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段放入37℃、10μL 50mmol/L Tris-HCl(pH 8.5)中过夜。
16. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，在20分钟内振荡凝胶片段三次提取多肽。
17. 使用5%甲酸/50%乙腈再提取多肽，依次振荡三次。
18. 如有需要，使用SpeedVac浓缩多肽。
19. 利用ZipTip脱盐及纯化多肽。
20. 如需，弱真空浓缩多肽至2μL。
21. 最后，加入基质进行质谱分析。

四、购买渠道

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